CY2-Glycocholic Acid Ethyl Ester花菁染料CY2标记甘氨胆酸乙酯CY3-Glycocholic Acid花菁染料CY3标记甘氨胆酸CY2-Glycocholic Acid Ethyl EsterCY2-GCA Et, 花菁染料CY2标记甘氨胆酸乙酯是一种将绿色荧光染料CY2共价标记于甘氨胆酸乙酯Glycocholic Acid Ethyl Ester, GCAE形成的荧光化合物。甘氨胆酸乙酯是胆酸Cholic Acid, CA与甘氨酸Glycine形成的酰胺并进一步在C24羧基上酯化形成乙酯其化学式约为C28H45NO6分子量约467 g/mol。甘氨胆酸乙酯保留了胆酸甾体四环结构A、B、C、D环以及C3、C7、C12羟基使分子保持刚性平面和空间构象。乙酯化修饰提高了分子疏水性使其更易溶解于有机溶剂便于与荧光染料进行共价标记反应。CY2是一种绿色荧光花菁染料激发波长约490 nm发射波长约510–520 nm具有高量子产率、光稳定性好和水溶性适中。通过CY2标记甘氨胆酸乙酯可生成兼具胆汁酸衍生物活性和荧光可追踪能力的分子用于细胞膜、脂质体及胆汁酸相关受体研究及药物递送系统监测。二、化学特性甾体骨架保留CY2-GCA Et保留甘氨胆酸乙酯的甾体骨架是分子与胆汁酸受体结合的核心结构。刚性四环结构提供空间构型使分子在膜结合或受体识别中模拟天然胆汁酸。羰基酯化修饰C24羧基的乙酯化修饰增加了疏水性利于溶解在有机溶剂中进行标记反应同时减小了分子末端的极性提高分子在脂质体系中的嵌入性。氨基功能化与荧光标记CY2染料通过其NHS酯或异氰酸酯活性基团与甘氨酸端氨基反应形成稳定酰胺键。该共价连接方式保证荧光团与甾体骨架和乙酯修饰部分空间分隔降低对分子活性的影响。光学特性CY2标记使甘氨胆酸乙酯获得绿色荧光可用于流式细胞仪、共聚焦显微镜以及体外分子追踪实验。量子产率高光稳定性良好适合长时间实验观察。三、合成过程CY2-Glycocholic Acid Ethyl Ester的合成一般可分为以下几个步骤甘氨胆酸乙酯制备原料甘氨胆酸Glycocholic Acid, GCA酯化反应GCA在C24羧基处与乙醇反应在酸催化条件下形成甘氨胆酸乙酯。反应条件可使用硫酸、对甲苯磺酸或DCC/DMAP作为催化剂温和反应温度室温至40°C反应时间数小时。生成物C24羧基乙酯化的甘氨胆酸即甘氨胆酸乙酯GCAE。CY2标记反应原理利用CY2的NHS酯或异氰酸酯活性基团与甘氨酸末端氨基发生亲核加成反应生成稳定酰胺键。步骤甘氨胆酸乙酯溶解于适量干燥DMSO或DMF。CY2-NHS酯溶于同一溶剂缓慢加入甘氨胆酸乙酯溶液中。反应在轻微碱性缓冲液pH 8–9中进行保持室温或略高温度25–35°C反应2–6小时避免光照。反应机理甘氨酸末端氨基的孤对电子攻击CY2活性碳原子形成四面体中间体经重排脱离NHS离去基团生成稳定酰胺键实现CY2标记。四、纯化过程反应终止与初步处理反应完成后可向体系中加入少量水或缓冲液终止反应并将未反应的CY2及副产物通过液-液提取或透析去除。柱层析纯化方法使用硅胶柱或反相C18柱通过梯度洗脱如甲醇-水或乙腈-水体系分离CY2-GCA Et与副产物及残余反应物。目标分离高纯度CY2-GCA Et提高荧光标记物稳定性和可重复性。高效液相色谱HPLC精制方法反相HPLC梯度洗脱检测波长490 nmCY2激发。目的获得纯度高于95%的标记化合物保证后续生物实验的可靠性。干燥与储存纯化后的CY2-GCA Et通常冻干或低温避光保存储存条件为-20°C并分装使用以减少冻融次数。五、实验注意事项避光操作保护CY2荧光团严格干燥条件避免水分水解NHS酯或酰胺键反应缓冲维持弱碱性pH 8–9以保证标记效率纯化过程中避免高温或长时间光照以保持荧光强度和分子稳定性。六、总结CY2-Glycocholic Acid Ethyl Ester花菁染料CY2标记甘氨胆酸乙酯是一种兼具甘氨胆酸乙酯生物活性和CY2绿色荧光可视化功能的标记化合物。其化学特性包括甾体骨架保留、C24羧基乙酯化、氨基功能化及共价连接稳定。合成过程包括甘氨胆酸乙酯的酯化、CY2的亲核加成标记反应以及柱层析和HPLC纯化。该分子可用于胆汁酸受体研究、细胞膜及胞内追踪、递送系统分析及体外分子行为观察为胆汁酸相关实验提供可靠荧光工具。