Pull-down技术是一种亲和捕获实验用于从复杂生物样本中富集与特定“诱饵”bait如蛋白、RNA、小分子特异性结合的“猎物”prey如蛋白质验证分子相互作用如PPI、RNA-蛋白互作。核心原理利用标签蛋白如GST或生物素标记诱饵与固相载体如磁珠、琼脂糖珠特异性结合加入样本后特异性结合的猎物被捕获非特异性成分经洗涤去除最后洗脱鉴定。常见类型 Pull-down技术 biorun.com类型 诱饵 载体 典型应用GST Pull-down GST融合蛋白 谷胱甘肽珠 蛋白-蛋白互作验证RNA Pull-down 生物素标记RNA探针 链霉亲和素磁珠 RNA结合蛋白筛选​His/MBP Pull-down His/MBP标签蛋白 Ni-NTA/淀粉珠 初步互作验证​小分子Pull-down 化合物偶联珠 磁珠/琼脂糖 药物靶点钓鱼​标准实验流程以GST Pull-down为例诱饵制备大肠杆菌表达GST-探针蛋白纯化后量化。Pull-down技术 biorun.com预处理磁珠用结合缓冲液平衡加入GST-诱饵孵育30min形成复合物。结合反应加入细胞/组织裂解液含蛋白酶抑制剂4℃孵育2-4h。Pull-down技术 biorun.com洗涤3-5次PBS0.1%Tween减少非特异吸附。洗脱煮沸SDS样品缓冲液或谷胱甘肽洗脱液。Pull-down技术 biorun.com检测SDS-PAGE银染/Coomassie观察条带WB验证特异蛋白LC-MS/MS鉴定未知互作蛋白。对照设置空载体GST、反义RNA探针、Input总蛋白确保特异性。Pull-down技术 biorun.com​结果解读阳性Sense/Pull-down泳道出现特异条带Input有表达对照无/弱信号。 武汉伯远生物 biorun.com阴性无特异条带或对照背景高优化洗涤/裂解。多组学衔接Pull-down富集蛋白→蛋白组鉴定→互作网络验证与基因编辑/MAS结合筛选育种靶点。Pull-down技术伯远生物Pull-down技术研发Pull-down技术